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第一章 绪论
第二章 实验研究的基本要素及人员条件
第三章 文献综述及文献检索
第四章 科学研究的选题和设计
第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
第八章 基础医学实验常用仪器及器件
第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
第十一章 膜片钳技术
第十二章 组织细胞培养技术
第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第七节 电泳仪
2009-06-02 19:08  

将两个电极插在电解溶液中,通上直流电,带电颗粒在电场力作用下向所带电荷相反的电极泳动,即正离子则向负极移动,而负离子向正极移动,这种现象就是我们熟悉的电泳现象,也称“电泳”。能够给电泳装置提供一定电压、电流条件的稳定直流电流装置称“电泳仪”。许多重要的生物分子如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都含有可电离基团,在非等电点条件下均带有电荷,在电场力的作用下,它们将向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳技术就是利用样品中各种分子带电性质、分子大小、形状等的差异,在电场中的迁移速度不同,从而对样品分子进行分离、鉴定、纯化和制备的一种综合技术。目前电泳技术已广泛应用于生物化学、分子生物学、药学、食品、工业、农业、卫生及环保等学科。电泳仪包括电源和电泳槽两部分。

(一)电泳槽

电泳槽主要用于盛放缓冲液、电极、滤纸等。一般用有机玻璃或玻璃胶制成,其种类很多,有圆盘电泳槽、垂直电泳槽(单、双)、多用途电泳槽、薄层等电点聚焦电泳槽、琼脂糖水平电泳槽、微型垂直电泳槽、微型卧式多用途电泳槽等,可根据实验要求选择。

(二)电源

电泳电源一般是直流电源,种类较多大致分为以下几类。

1. 普通直流电源 这种电源不稳压也不稳流,它是直接通过整流电路把交流电源变为直流电源。

2. 稳压直流电源 相对普通电源,当交流电电压或负载电流发生变化时,整流器输出电压也会随之发生变化。但许多电子设备、精密仪器需要直流电压,所以必须采用直流稳压电路。直流稳压电路与整流器、滤波器组合在一起构成直流稳压电源。一般用于对稳压、稳流不太高的电泳中。

3. 稳流稳压电源 一般在电泳过程中,最好能维持电压或电流的稳定。在某些情况下稳流比稳压使用要多一些。电流不变,液体蒸发就少,在室温变化较大时用稳流得到的结果重复性较好。在电压高时,泳动较快,短时间可得到清楚的电泳谱。电压高易产生大量的热,因蒸发严重等因素使移距缩短。故应根据电泳的要求选择合适的电源。

4. 三恒(恒压、恒流、恒功率)电源 通常电泳仪仅有两个参数即电压和电流,现已出现了电压、电流、功率可控的三恒电泳仪。这种电泳仪大大提高了分离分析水平。

现以常用于蛋白、核酸电泳的普通稳压稳流EPS100型电泳仪为例介绍其使用方法。

(三)操作步骤

1. 首先确定仪器电源开关应处于关闭状态。

2. 连接电源线,确定电源插座是否有接地保护。

3.将黑红两种颜色的电极线对应插入仪器输出插口,并与电泳槽相对应插口连接,一定要正极接正极,负极接负极 (如果发现电极插头与插口之间接触较松,可以用小改锥将插头的簧片向外拨一下)。

4. 确定电泳槽中的试剂配制是否符合要求。

5. 打开电泳仪左侧的电源开关。

6. 按“功能键/设定键”选择电压、电流、时间,配合“上调”、“下调”电压调节旋钮或电流调节旋钮调到所需电压或电流。如果不熟悉如何预置电压电流,可以先确定是恒压输出,还是恒流输出。如果是恒流输出,则将电流调节为0,将电压调至最大,然后开机,此时缓缓调节电流调节旋钮,直到所需电流值。如果是恒压输出,则将电压调为0,将电流调为最大,然后开机,缓缓调节电压旋钮至所需电压值。注意,电源在任何情况下只能稳定一种参数(电压或电流),电压电流之间的关系符合欧姆定律。

7. 按下“停止/输出键”,电泳仪开始工作,如要中途中断电泳,再按下“停止/输出键”。

(四)注意事项

1. 电极连接一定要正极接正极,负极接负极。

2. 电泳仪与电泳槽联好后,一定要先倒上电解液,上好样品后,再设定条件通电电泳。

3. 调电流、电压时,不要超出额定范围,在电泳过程中,电泳装置如有异常发热,立即关闭电泳仪。

4. 在电泳过程中不能裸手接触电极、电解液,电泳完毕后一定要拔出电极,关闭总电源。

5. 常用电泳仪一般均有两组并联输出插口,可以同时接两个电泳槽,但要求这两组电流之和不超过仪器的最大值。此时最好采用稳压输出,以减少两槽之间的相互影响。

6. 如发现只有电压显示而电流输出为零,应检查输出端到电泳槽之间是否断路。

7. 使用中发现异常情况应立即关机,如果是仪器故障,应请维修人员负责检修。

 

                                                       (陈健康)
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