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第一章 绪论
第二章 实验研究的基本要素及人员条件
第三章 文献综述及文献检索
第四章 科学研究的选题和设计
第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
第八章 基础医学实验常用仪器及器件
第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
第十一章 膜片钳技术
第十二章 组织细胞培养技术
第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第七节 实验动物的外科技术及急救
2009-06-02 20:57  


    一、实验动物常用的外科基本技术
   (一)基本操作技术
    1. 切开 根据实验要求确定手术切口的部位及大小。切开时先绷紧皮肤,将刀刃与皮肤垂直,用力要得当,一次切开皮肤全层,切缝整齐而不偏斜。切开皮肤及皮下组织时,一般要求按解剖层次逐层切开,注意止血,避免损伤深层的重要组织器官(图9-23,图9-24)。

图9-23

                                 图9-24
     2.止血 止血是手术操作中的重要环节。手术过程中止血完善与否,不仅直接影响手术部位的显露和手术操作,而且关系到手术后动物的安全、切口愈合的好坏以及是否造成并发症等。术中止血必须准确、迅速、可靠。常用的止血方法有:
   (1)预防性止血:术前1~2h内使用一些能提高血液凝固性的药物,以减少术中出血。常用的预防性止血剂有10%氯化钙溶液、10%氯化钠溶液。
局部麻醉时,配合应用肾上腺素,即在1000ml普鲁卡因溶液中加入0.1%肾上腺素2ml,利用其收缩血管的作用,达到减少手术部位出血的目的。在四肢末梢、阴茎、尾部手术时,为避免出血过多,可在手术部位的上方缠以止血带,待手术部位彻底止血后松开。
   (2)术中止血:①压迫止血:手术中出血一般可先用灭菌纱布或拧干的温热盐水纱布按压片刻,切勿用干纱布擦拭,以减少组织损伤。②钳夹止血:用止血钳与血流方向垂直夹住血管断端,停留一段时间后取下止血钳。③结扎止血:常用于压迫无效或较大血管的出血。出血点用纱布压迫蘸吸后,用止血钳逐个夹住血管断端,要夹准、夹牢,但应尽量少夹周围组织,再用丝线结扎止血。结扎时,先竖起止血钳,将结扎线绕过钳夹点之下,再将钳放平后钳尖稍翘起,打第一个结时,边扎紧边轻轻松开止血钳,再打第二个结。线结的种类有方结(平结)、外科结和三叠方结(图9-25)。打结方法有手打结和器械打结两种(图9-26,图9-27)。④烧烙止血:以烧热的烙铁烧血管的断端,使血液和组织凝固,从而达到止血的目的。⑤药物止血:当内脏出血时,可用纱布吸净积血,然后将止血粉、云南白药或凝血酶等涂撒在创面上,稍加压5~10s即可止血。

图9-25

 图9-26

                                 图9-27
    3. 组织分离法 分离组织的目的在于充分显露深部组织,造成手术径路,便于切除病灶。操作时要注意以下原则:①在同一平面上力求一次垂直切开,以保切口边缘整齐,禁止斜切和锯切,以减少损伤,便于愈合。②在切开多层组织时,一般应按组织层次分层切开,切口大小应适当。③切开肌肉时,一般应沿肌纤维方向进行。④要确保切口创伤分泌物的顺利排出。
组织分离方法有两种:
   (1)锐性分离法:使用刀、剪等锐性器械作直接切割的方法,该法用于皮肤、黏膜、各种组织的精细解剖和紧密粘连的分离。
   (2)钝性分离法:使用刀柄、止血钳、剥离器或手指等分离肌肉、筋膜间隙的疏松结缔组织的方法。
    软组织分离要求按解剖层次逐层分离,保持视野干净、清楚。原则上以钝性分离为主,必要时也可使用刀、剪。①结缔组织的分离:用血管钳插入撑开,作钝性分离。对薄层筋膜,确认没有血管时可使用刀剪。对厚层筋膜,因其往往内含血管而不易透见,不要轻易使用剪刀。使用血管钳作钝性分离时,应慢慢地分层,由浅入深,避开血管。若需用锐器,应事先用两把血管钳作双重钳夹(有时甚至结扎),再在两钳之间切断。②肌肉组织的分离:应在整块肌肉与其他组织之间,一块与另一块肌肉分界处,顺肌纤维方向作钝性分离,肌肉组织内含小血管,若需切断,应事先用血管钳作双重钳夹,结扎后才可剪断。③血管神经的分离:顺其直行方向,用玻璃分针小心分离,切忌横向拉。
    4. 缝合法 缝合方法很多,但归纳起来主要有间断缝合、连续缝合和毯边缝合(图9-28),还有减张缝合、褥式缝合、荷包缝合和“8”字形缝合。间断缝合是最常用缝合方法,一般组织均可采用;连续缝合常用于缝合腹膜及胃肠道等,较快,并有一定的止血作用;毯边缝合常用于皮片移植缝合、胃肠吻合时缝合后壁全层等,边缘对合整齐,有一定止血作用;褥式缝合常用于胃肠道、血管等处的缝合;减张缝合常用于缝合皮肤,可与其他缝合并用,其特点是缝线的进出孔距创缘较远(2~4cm),或在打结前装上纱布圆枕,以减少组织张力,防止组织被缝线撕裂;荷包缝合常用于缝合胃肠道小穿孔及包埋阑尾残端等;“8”字形缝合常用于缝合筋膜、腱膜、肌肉等。

                             图9-28 
    缝合前,应彻底止血,并清除腔内异物、凝血块及坏死组织。缝针的入孔和出孔要对称,距创缘0.5~1cm左右。缝线松紧适宜。打结最好集中于创缘的同一侧。必要时考虑作减张缝合和留排液孔。缝合时,必须遵守无菌常规。
    外部创口缝线经一定时间后(约7~14d),均需拆除。根据创口缝合情况,可决定分次拆除或一次拆除。创口化脓时,根据治疗需要拆除全部或部分缝线。拆线前,在缝合处,尤其在缝线和针孔上,需用碘酒和酒精消毒。拆线时,需注意拆线的方法(图9-29)。 

                              图9-29

(二)基本手术
    1. 颈部手术
   (1)气管插管术:以家兔为例。术中需使用常用手术器械、丝线、棉球、“Y”形气管套管、手术台、20%乌拉坦等。手术前,动物麻醉(20%乌拉坦1g/kg体重耳缘静脉注射),仰卧位固定,备皮。然后,用解剖刀在颈部,自甲状软骨下缘,沿下中线作一长约5~7cm皮肤切口,暴露胸骨舌骨肌。用血管钳插入左右胸骨舌骨肌之间,作钝性分离(也可用两食指分离)。分离时,血管钳不可插得太深,以免损伤小血管。将两块肌肉向两边拉开,暴露气管约5cm。用弯头血管钳将气管与背后的结缔组织分开,穿线备用。用解剖刀或手术剪在甲状软骨下1cm处的气管两软骨环之间作一倒“T”形切口。切口不宜大于气管直径的1/3。如气管内有血液或分泌物,先用小棉球揩尽,以保证呼吸道通畅。然后,用镊子夹住切口一角,用适当口径的气管套管由切口处向胸端插入气管内,用备用线扎牢并固定于侧管上,以免脱落。 
   (2)颈部血管分离及插管术:首先剥离神经和血管,在神经或血管附近结缔组织中插入大小合适的止血钳,顺着神经和血管走行方向扩张止血钳,逐渐将其周围结缔组织剥离。分离细小神经或血管时,先用蚊式止血钳或玻璃分针沿神经或血管走行方向将其周围的结缔组织层层分开,再用玻璃分针将神经或血管完好地分离出来。最后用眼科镊子在神经或血管的下面穿过一条浸有生理盐水的细线,以备将神经或血管提起及结扎用。分离术完毕后,用一块浸有温热的生理盐水纱布盖在切口组织上,以保持切口部位的湿润。
    1)颈外静脉-右心房插管术:在急性实验中,颈外静脉插管常用于注射各种药物、取血、输液和测量中心静脉压。兔和狗的颈外静脉较粗大,是头颈部的静脉主干。颈外静脉分布很浅,位于颈部皮下胸骨乳突肌的外缘。分离时,将皮肤的一侧切开,用手指在颈皮肤外面向上顶起,即可看到呈暗紫红色的颈外静脉,用钝头止血钳或玻璃分针沿血管走行方向,将静脉周围的结缔组织轻轻分离。
    颈外静脉插管前,首先准备长短适当、内径为0.1~0.2cm的塑料管或硅胶管,插入端要剪成斜面,另一端连接输液或静脉压测量装置。插管时先用动脉夹夹住静脉近心端,待静脉充盈后再结扎远心端。用眼科剪在静脉上靠远心端结扎处,呈45°角剪一马蹄形小口,约为管径的三分之一或二分之一,插入导管。将备用线打一个结,取下动脉夹,把导管慢慢向右心房方向送至所需长度。测量中心静脉压时,兔需插入约5cm,狗插入约15cm,此时导管口在上腔静脉近右心房入口处,可从中心静脉压检测仪中观察到液面停止下降并随呼吸明显波动,结扎固定导管。如果颈外静脉用作注射、输液等,导管一般送入2~3cm即可。
    2)颈总动脉的分离与插管:在急性实验中,颈总动脉导管作测量动脉血压或放血用。颈总动脉位于气管外侧,其腹面被胸骨舌骨肌和胸骨甲状肌所覆盖。分离两条肌肉之间的结缔组织,可找到呈粉红色较粗大的血管,用手指触之有搏动感,即为颈总动脉。颈总动脉与颈部神经被结缔组织膜束在一起,称颈部血管神经束。用左手拇指和食指抓住颈皮和颈肌,以中指顶起外翻,右手持蚊式止血钳或玻璃分针,顺血管神经的走行方向分离出颈总动脉。操作时应注意颈总动脉在甲状腺附近有一较大的侧支,为甲状腺前动脉,分离时勿将其切断。分离过程中,须经常地用生理盐水湿润手术野,并拭去附近的血液。为了便于插管或作颈总动脉加压反射等操作,颈总动脉应尽量分离得长些(大白鼠、豚鼠2~3cm,兔3~4cm,狗4~5cm)。
    颈总动脉插管所用导管同颈外静脉导管,其内充满肝素生理盐水溶液。分离的颈总动脉下置两根备用线,用一根结扎动脉远心端,将近心端用动脉夹夹住,另一根线打一活结于动脉夹与远心端结扎线之间。血管切口同颈外静脉。导管插入动脉管腔1~2cm,然后用线打结,其松紧以放开动脉夹后不致出血为度。结扎固定后再围绕导管打结固定,以免导管滑脱。未测量前暂勿放开动脉夹。
   (3)颈部迷走、交感、减压神经的分布情况及分离。
    1)颈部迷走、交感、减压神经的分布。①兔:在颈部分离出气管后,其外侧由结缔组织的包绕颈总动脉与三根粗细不同的神经而形成血管神经束。最粗者即为迷走神经,呈白色;较细者为颈部交感神经干,呈灰白色,交感神经干有到心脏去的分支;最细者为减压神经,属于传入性神经。其神经末梢分布在主动脉弓血管壁内。减压神经一般介于迷走和交感神经之间,但其位置常有变异,且变异率很大。②猫:交感神经与迷走神经并列而行,交感神经较细而迷走神经较粗大,减压神经并入迷走神经中移行。③狗:在颈总动脉背侧仅见一粗大的神经干,称为迷走交感神经干。迷走神经的结状神经节与交感神经的颈前神经节相邻。迷走神经于第一颈椎下面进入颈部,与交感神经干紧靠而行并被一总鞘所包,联合而成迷走交感神经干。
    2)颈部迷走、交感、减压神经的分离方法。其分离暴露方法同颈总动脉。可根据神经的形态、位置和行走方向等特点进行辨认。辨认时可用眼科镊将颈血管神经束附近的结缔组织膜夹住,轻轻拉向外侧,或在颈总动脉下穿一根线,轻轻提起,即可看到血管、神经自上而下排列在结缔组织膜上。迷走神经和交感神经很容易辨认,而减压神经仅在兔为一条独立的神经,较容易辨认,而在人、马、猪、狗等动物,此神经并不单独走行,而是行走于迷走交感干或迷走神经中。因减压神经较细,极易受损伤,故应先用玻璃分针将其周围组织分离,然后再分离其他神经,分离长度一般为2~3cm长。分离后,置经生理盐水湿润的细线于各条神经之下面,各打一虚结后备用。
    3)颈部膈神经的分离方法:切开颈部皮肤,分离皮下组织,暴露出气管和胸骨乳突肌,可见有一静脉紧贴于皮下走行于胸骨乳突肌的外缘,此为颈外静脉。用止血钳轻轻将颈外静脉和胸骨乳突肌向深处分离,当分离到气管边缘时,可见沿后外方走行的较粗的臂丛神经,其内侧有一条较细的神经,约在颈部下1/5处横跨臂丛并与之交叉,向内后走行,即为膈神经,辨清膈神经后,用玻璃分针小心地将膈神经分出1~2cm,于神经下置一线备用。如需在实验中记录电位,可小心剥去神经干周围的结缔组织膜,则可以提高记录电位幅度。
    2. 胸部手术 以家兔为例。由于家兔解剖学上的特点:左右两侧胸腔不通,心脏又在两侧胸膜腔之外的纵隔中。所以很多心脏实验都利用此特点进行,现介绍一种出血少而又不易使胸膜破损的开胸方法。
家兔仰卧位固定、备皮,沿胸部正中胸骨柄上作局麻,由胸骨柄窝上方1cm向胸骨柄正中作5~6cm皮肤切口。然后将胸骨柄窝上方的颈阔肌进行分离,分离不宜过深,以免损伤静脉,分离方向紧贴胸骨柄下,用粗剪刀沿胸骨柄正中剪开,若偏离正中易剪破胸膜。最后用粗棉线穿过切开的胸骨柄牵引扩张,充分暴露心脏。
    在使用剪刀时,要注意向上挑起,以防剪破胸膜;手术中应尽量减少出血,如出血较多时,先用止血钳将出血点夹住,再用线结扎止血。
    3. 腹部手术 输尿管插管术以家兔为例。术中需使用常用手术器械、丝线、棉球、玻璃分针、“Y”形导尿管(可同时插两侧的输尿管)、兔手术台、20 %乌拉坦等。手术前,将动物麻醉,仰卧位固定,剪去耻骨联合上腹部的部分被毛。然后,做耻骨联合上缘向上的下腹部正中切口,长3~4cm。再用手术剪沿腹白线剪开腹壁及腹膜,注意勿伤腹腔内脏器官。寻找膀胱,并将其翻出腹外,在膀胱底两侧找到输尿管。注意术中用温热盐水纱布覆盖手术视野,以保持腹腔内温度与湿度。找到输尿管后,在输尿管靠近膀胱处用丝线扣一松结备用,用弯头小镊或小指托起输尿管,用眼科剪在其上剪一小斜口(呈45°角,约为输尿管直径的1/2)从小口处向肾脏方向插入导尿管(事先充满生理盐水),并用备用丝线固定之,防止滑脱。插好后,可见管内有尿液慢慢流出。插管要轻,防止出血。
    4. 股部手术
   (1)股动、静脉和股神经分离术:股三角内的血管、神经包括股动脉、股静脉和股神经,处于一层深筋膜之下。分离时,可用蚊式止血钳在耻骨肌与缝匠肌交点处小心地沿缝匠肌后部内侧缘分离,并将缝匠肌后部轻轻向外拉开,其下方即见深筋膜包围着的血管神经束。仔细分离深筋膜后,血管、神经即完全暴露。股静脉位于内侧,股神经位于外侧,股动脉位于中间(图9-30)。用玻璃分针或蚊式止血钳小心分离各血管、神经之间的结缔组织膜,并穿线备用。

                              图9-30
   (2)股动、静脉插管术:在大动物的急性实验中,为了便于随时通过动脉、静脉给药,故常需要做股动、静脉插管术。以家兔的股静脉插管为例。用蚊式止血钳分离出一段股静脉,在其下方穿两条线,一条先在静脉远心端结扎,再用小镊子将近心端静脉管前壁轻轻提起,用眼科剪直剪,呈45°角,剪开血管直径的1/3,注意,血管切口面一定要呈倒“V”样的斜切面然后将静脉导管插入,并用另一条线将导管固定在静脉腔内。
如要从股动脉放血或快速注射高渗葡萄糖溶液或输血时,就须做动脉插管。插管前先要在套管内充满0.5%肝素,插管方法同上。
    二、实验动物的急救措施
    当实验进行中因麻醉过量、大失血、过强的创伤、窒息等各种原因,而使动物心跳减弱甚至停止、血压急剧下降甚至测不到;呼吸极慢而不规则甚至呼吸停止、角膜反射消失等临床死亡症状时,应立即进行急救。急救的方法可根据动物情况而定。对狗、兔、猫常用的急救措施有下面几种。
    1. 人工呼吸 用双手按压动物胸廓进行人工呼吸。如有电动人工呼吸器,可行气管插管后,再连接人工呼吸器进行人工呼吸。一旦动物恢复自主呼吸,即可停止人工呼吸。
采用人工呼吸器时,应调整其容量:大鼠为50/min,每次8ml/kg,即400ml/(kg·min);兔和猫为30/min,每次10ml/kg,即300ml/(kg·min);犬为20/min,每次100ml/kg(即2000ml/(kg·min)。
    2. 针刺 针刺人中穴对抢救家兔效果较好。对狗用每分钟几百次频率的脉冲电刺激膈神经效果较好。
    3. 注射强心剂 可以静脉注射0.1%肾上腺素1ml,必要时直接作心脏内注射。肾上腺素具有增强心肌收缩力,使心肌收缩幅度增大与加速房室传导速度,扩张冠状动脉,增强心肌供血、供氧及改善心肌代谢,刺激高位及低位心脏起搏点等到作用。
当动物注射肾上腺素后,如心脏已搏动但极为无力时,可从静脉或心腔内注射1%氯化钙5ml。钙离子可兴奋心肌紧张力,而使心肌收缩加强,血压上升。
    4. 注射呼吸中枢兴奋药
   (1)可从动物静脉一次注射25%尼可刹米1ml。此药可直接兴奋延髓呼吸中枢,使呼吸加速加深;对血管运动中枢的兴奋作用较弱。在动物抑制情况下作用更明显。
   (2)可从动物静脉一次注射1%山梗茶碱0.5ml。此药可刺激颈动脉体的化学感受器,反射性地兴奋呼吸中枢;同时此药对呼吸中枢还有轻微的直接兴奋作用。作为呼吸兴奋药,它比其他药作用迅速而显著。呼吸可迅速加深加快,血压亦同时升高。
    5. 动脉快速注射高渗葡萄糖液 一般常采用经动物股动脉逆血流加压、快速、冲击式的注入40%葡萄糖溶液。注射量根据动物而定,如狗可按2~3ml/kg体重计算。这样可刺激动物血管内感受器,反射性地引起血压呼吸的改善。

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