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第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
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第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第九节 动物离体标本制备
2009-06-02 21:34  

 

一、蛙或蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备

1. 实验原理 蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似,而其离体组织生活条件易于掌握,在任氏液的浸润下,神经肌肉标本可较长时间保持生理活性,因此,在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。

2. 实验器材与药品 蛙类手术器械和药品1套,包括:蛙板、小玻板各1块,粗剪刀、直剪刀各1把,大镊子、小镊子各1把,眼科剪刀1把、探针1根、玻璃分针2根,大烧杯、小烧杯各1个,滴管1支,培养皿1个,棉线,任氏液,锌铜叉。

3. 实验方法和步骤

1)破坏脑脊髓:取蟾蜍一只,用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍,用食指压住头部前端使头前俯,右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔(图9-33),左右搅动捣毁脑组织,然后将刺蛙针退到枕骨大孔,不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓,插入椎管时,蟾蜍后肢立即失去紧张性,多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全,可见蟾蜍四肢松弛,呼吸消失。

2)剪除上肢和内脏:在骶髂关节上0.51.0cm处用粗剪刀剪断脊柱。用镊子夹住后端脊柱,以剪刀沿脊柱两侧剪除所有内脏及头胸部,留下后肢、骶骨、后端脊柱及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经(图9-34)。

3)剥皮:左手用镊子或直接用手捏住脊柱断端(注意不要压迫神经),右手捏住断端边缘皮肤,向下剥去全部后肢皮肤(图9-35),将标本置于盛有任氏液的培养皿中。将手和用过的器械洗净后再进行以下步骤。

4)分离两腿:用玻璃分针沿脊柱两侧游离出两条坐骨神经,并于近脊柱处各扎一细线,然后在扎线与脊柱之间剪断神经。提着神经上的细线,将两条坐骨神经分别置于两条大腿上,左手持脊柱,将骶骨翘起,将下位脊柱全部剪除。捏着两侧髂骨向反方向分离,使耻骨联合脱臼后,沿耻骨联合正中将两下肢剪开,将一条腿浸于任氏液中备用,另一条置于浸有任氏液的玻璃板上。

5)游离坐骨神经和剪断股骨:认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位,用剪刀剪断梨状肌及其周围的结缔组织,左手提着神经上的细线,右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细心剥离,直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经放在下腿上,沿膝关节的周围将大腿的所有肌腱剪断,并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉,在股骨上1/3处剪去上段股骨及所附的肌肉,这样制成的称为坐骨神经下腿标本(图9-36)。

6)游离腓肠肌:在坐骨神经下腿标本的基础上,用剪刀将跟腱的下端剪断,在跟腱与肌肉交界处扎一条细线,左手提线,右手用剪刀游离腓肠肌,直到膝关节。最后用粗剪刀在膝关节下将小腿剪去,留下的即为坐骨神经腓肠肌标本(图9-37)。做好的标本用锌铜叉的两极轻轻接触坐骨神经,如腓肠肌立即收缩,表示标本的兴奋性良好,然后将标本放入任氏液中,待其兴奋性稳定后再进行实验。

4. 注意事项

1)已剥离皮肤的组织避免接触皮肤毒液或其他不洁物。

2)分离神经时,一定要用玻璃分针,不能随便用刀、剪进行操作。

3)不能过分牵拉神经,以免造成损伤。

4)标本制备过程中应适当地用任氏液湿润标本。

5)避免用手指或金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分。

二、离体蛙心标本的制备

1. 标本制备

1)暴露蛙心:取蟾蜍一只,毁坏脑和脊髓,将其仰卧固定在蛙板上。从剑突下将胸部皮肤向上剪开或剪掉,然后剪掉胸骨,打开心包,暴露心脏和动脉干。

2)观察心脏的解剖结构:在腹面可以看到一个心室,其上方有两个心房,心室右上角连着一个动脉干,动脉干根部膨大为动脉圆锥,也称动脉球。动脉向上可分左右两支。用玻璃针从动脉干背部穿过,将心脏翻向头侧,在心脏背面两心房下面,可以看到颜色较紫红的膨大部分,为静脉窦,这是两栖类动物心脏的起搏点,观察静脉窦、心房、心室间收缩的先后关系(图9-38)。

3)心脏插管:先用丝线分别结扎右主动脉、左右肺动脉、前后腔静脉,也可以在心脏下方绕一丝线,将上述血管一起结扎,但此结扎应特别小心,勿损伤静脉窦,以免引起心脏骤停。结扎时,可用蛙心夹在心舒期夹住心尖,将心脏连线提起,看清楚再结扎。准备插管,在左主动脉下穿一丝线,打一松结,用眼科剪在左主动脉上向心剪斜口(一定要剪破动脉内膜),让心脏里的血尽可能流出(以免插管后血液凝固)。用任氏液将流出的血冲洗干净后,把装有任氏液的蛙心插管插入左主动脉,插至主动脉球后稍退出,再将插管沿主动脉球后壁向心室中央方向插入,经主动脉瓣插入心室腔内。此时可见插管内液面随心搏上下移动。将预先打好的松结扎紧,并将线固定在插管壁上的玻璃小钩上防止滑脱,用滴管吸去插管内液体,更换新鲜的任氏液,小心提起插管和心脏,在上述血管结扎处的下方剪去血管和所有的牵连组织,将心脏离体。此时,离体蛙心已制备成功,可供实验(图9-39)。

2. 注意事项

1)制备蛙心标本时,勿伤及静脉窦。

2)每次换液时,蛙心套管内液面应保持同一高度。

3)随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。

三、离体主动脉条

1. 制备方法 取兔或大鼠一只,猛击其头致死,立即剖开胸腔,分离胸主动脉,尽可能于近心脏处把其切断,迅速置于盛有克氏液并通以95%氧气及5%二氧化碳的培养皿中,剔除血管外结缔组织及脂肪,洗去凝血块,轻轻套在较主动脉稍小的玻璃棒上。然后用眼科剪把主动脉作螺旋形剪开,制成宽约3mm、长1.5~2cm的主动脉条,两端分别用线结扎,置于盛有克氏液并通以95%氧气及5%二氧化碳的恒温37℃的麦氏浴管内,平稳90~120min后进行实验。也可把胸主动脉剪成多个宽2mm的动脉环代替血管条做实验。

2. 注意事项

1)本标本勿用手拿,应以镊子夹取,且不可在空气中暴露过久,以免失去敏感性。

2)克氏液必须用新鲜蒸馏水配制。

3)余下的动脉条连同克氏液置于4℃冰箱中,1~2天内仍可用做实验;采用大白鼠主动脉条时,可制成宽2~2.5mm,长2~3cm

四、离体气管标本制备

1. 气管连环标本 豚鼠1只,体重500g,用木槌击毙,立即从腹面正中切开皮肤和皮下组织,细心分离出气管,自甲状软骨下剪下整段气管,置于盛有Kerbs营养溶液的平皿中,剪除气管周围组织。从软骨环之间由前向后和由后向前进行交叉横切,均不完全切断而保留一小段。从上到下约横切1015处。然后两端缝上线,一端固定,另一端拉开,即成气管连环。

2. 气管螺旋条标本 将气管由一端向另一端螺旋形剪成条状,每23个软骨环剪一个螺旋。亦可用一根直径23mm的玻璃棒或竹棒,将气管套在其上,用剪刀剪成或用手术刀切成螺旋状。整个螺旋长条可作一只实验标本,也可用半段螺旋条做一标本。

注意事项:分离气管及制作气管螺旋条标本时,动作要敏捷而轻柔,切勿用镊子夹伤气管平滑肌。

 

                                               (王跃民)

 

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