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第一章 绪论
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第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
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第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
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第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第二节 染色体G显带技术
2009-06-02 17:28  

1. 实验原理 人们用物理、化学因素处理后,再用染料对染色体进行分化染色,使每条染色体上出现明暗相间,或深浅不同带纹的技术称为显带技术(banding technique)。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性,所以每一条染色体都有固定的分带模式,即称带型。染色体带型是鉴别染色体的重要依据。染色体分带技术可分为两大类,一类是产生的染色带分布在整条染色体的长度上如:GQR带;另一类是局部性的显带,它只能使少数特定的区域显带,如CTN带。

染色体带型的形成主要取决于DNA、核酸结合蛋白及染料三者的相互作用,主要是指DNA的碱基组成以其与结合蛋白形成的特定结构对染料分子的作用。Summer(1974)的实验表明,DNA分子的螺旋及折叠非组蛋白蛋白质的分布在染色体上呈区域性差异,这些差异导致二硫键与硫氢键分布不同,深染区由许多二硫键交联,因为它易与染料结合;而浅染区则缺乏二硫键、多硫氢键,不易与染料结合而呈浅色。此外,由于染色体内DNA的碱基分布不同而造成DNA螺旋,折叠的程度也不同,继而影响到结合蛋白的分布与构型,与染料结合后呈现深浅不同的带纹。

G带即吉姆萨带,是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等处理后,再经吉姆萨染料染色后所呈现的区带,是目前被广泛应用的一种带型。其特性是显带方法简单恒定,带型稳定,保存时间长。一般认为,易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段,在间期核呈固缩状态,而且是DNA晚复制区之一,有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区;相反,含GC多的染色体段则不易着色。也有人认为,Giemsa染料在G带区是与DNA结合,而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。总的来说,G显带的机制还未搞清。

2. 实验对象 体细胞培养后制备的染色体标本;淋巴细胞培养后制备的染色体标本。

3. 试剂与器材

1)用具:离心管,离心机,天平,37温箱,载玻片,盖玻片,恒温水浴锅,光学显微镜,标本板,玻璃铅笔,定时钟,染色缸,直柄虹膜镊,滴管。

2)药品:pH6.8 PBSGiemsa0.025%胰蛋白酶(取0.9%氯化钠100ml,加0.25%胰蛋白酶1ml)。

4. 实验步骤

1)将制好的染色体标本,置72℃~75烤箱中烤片3h

2)放入预温至370.025%胰酶溶液中(pH=7.27.4)消化1min左右,每次的作用时间并不完全相同,可先试一张片子,再根据显带效果调整胰酶作用时间。

3)在Giemsa 染液中染色10min,自来水冲洗干净,晾干后,即可阅片。

4)镜检:在显微镜高倍目镜下检查显带标本,在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型,即为可取标本,可供摄像分析(图13-1)。

5. 注意事项

1)胰蛋白酶浓度和处理时间随气温高低有所不同。一般规律是标本存放时间越长,在胰蛋白酶当中处理时间越长。太新鲜的标本,染色体会出现毛茸现象。片龄很长的标本往往会导致斑点状的染色体。

2)胰蛋白酶温度:温度越高,反应的速度就越快,一般是室温,但温度必须稳定至少20min

3)胰蛋白酶处理的时间:如果细胞呈紫蓝色,说明胰蛋白酶的作用时间不够,如果细胞呈桃红色,说明作用时间刚好。

附:

人类23对染色体的G显带记忆口诀与表13-1

一秃二蛇三蝶飘,四像鞭炮五黑腰;

六号像个小白脸,七盖八下九苗条;

十号长臂近带好,十一低来十二高;

十三、四、五、四二一;十六长臂缢痕大;

十七长臂带脚镣,十八白头肚子饱;

十九中间一点腰,二十头重脚飘飘;

二十一好像黑葫芦瓢,二十二头上一点黑;

X染色一担挑,Y染色长臂带黑脚。

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