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第一章 绪论
第二章 实验研究的基本要素及人员条件
第三章 文献综述及文献检索
第四章 科学研究的选题和设计
第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
第八章 基础医学实验常用仪器及器件
第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
第十一章 膜片钳技术
第十二章 组织细胞培养技术
第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第四节 小鼠骨髓的染色体制备
2009-06-02 17:32  

1. 实验原理 小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性,并且数量非常多,因此不必进行体外培养,可直接观察到分裂期细胞。处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,阻断纺锤丝的形成,使细胞分裂停止于中期,此时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。低渗处理使细胞破裂,便于染色体分散。该方法在临床上多用于白血病的研究,也可用于观察毒性物质对机体遗传物质——染色体损伤的状况。

小鼠染色体2n=40,均为端着丝粒染色体, 雄性为40XY,雌性为40XX

2. 实验试剂与器材 显微镜、恒温水浴锅、低速离心机、电子天平、解剖器械(搪瓷解剖盘、剪刀、镊子),注射器、针头、试管、试管架、滴管、载玻片。

0.85%生理盐水、固定液(甲醇∶冰醋酸为31)PBS(pH6.8)Giemsa染液、秋水仙素(100μg/ml的浓度溶于0.85%生理盐水中)0.075mol/L KCl

3. 实验方法与步骤

1)秋水仙素处理:取骨髓前3h先给小鼠腹腔注入秋水仙素,注射剂量为100μgkg动物体重。

2)取骨髓:用损伤脊髓法处死小鼠,然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉,取出大腿骨,用一小块纱布搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头,然后用注射器吸取5ml 0.85%生理盐水,插入股骨一端,将骨髓细胞冲洗至10ml的离心管中。可重复冲洗多次,直至骨髓腔呈白色为止。

3)低渗处理:将所获得的细胞悬浮液以 1000rpm离心10min,吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加0.075mol/L KCL 溶液(37)至8ml刻度,将细胞沉淀物吹散打匀,在37水浴低渗25min

4)固定:低渗处理后,立即加入1ml新配制且预冷的固定液,抽打均匀,然后1000 rpm离心10min,弃上清。沿管壁加固定液至6ml, 吹散细胞后静止固定10min,即第一次固定。按上述条件离心,去上清液,再次加入固定液至6ml,进行第二次固定。10min后离心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液,冲匀制成细胞悬液。

5)滴片:取事先在冰箱中预冷的载玻片,从约15cm高处向每个载玻片上滴12滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上,晾干。

6)染色:取制片平放在玻璃板上,用19 Giemsa染液染色20min,流水冲洗后晾干。

7)观察:小白鼠染色体的形态特征,并计算2n的染色体数目。
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