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第一章 绪论
第二章 实验研究的基本要素及人员条件
第三章 文献综述及文献检索
第四章 科学研究的选题和设计
第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
第八章 基础医学实验常用仪器及器件
第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
第十一章 膜片钳技术
第十二章 组织细胞培养技术
第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第一节 直接凝集反应
2009-06-03 20:24  

某些病原微生物或红细胞悬液等颗粒性抗原与相应抗体结合,在有适量电解质存在下,经过一定时间出现肉眼可见的凝集小块,称为凝集反应(agglutination)。
根据反应的方式不同,凝集反应可分为直接凝集反应、间接凝集反应和抗球蛋白试验等。直接凝集反应时颗粒性抗原和相应抗体直接结合,在有电解质存在的条件下,出现肉眼可见的凝集小块,为直接凝集反应。有玻片凝集法和试管凝集法。前者是一种定性实验,多用已知诊断血清检验未知抗原和进行细菌分型,也可以用来鉴定人类红细胞ABO血型;后者是一种半定量试验,用于鉴定被检者血清中有无某些病原菌的抗体及其含量,以协助临床诊断或供流行病学调查研究。本节将通过玻片凝集法和试管凝集法详细介绍直接凝集反应。
   (一)玻片凝集试验
   (1)取洁净载玻片1片,一端滴生理盐水1滴作为对照,另一端滴加诊断血清1滴。
   (2)用接种环取分离好的病原菌,于生理盐水中和诊断血清中分别混匀(注意不可先涂血清后涂盐水以免发生误差)。
   (3)室温静置数分钟。如果抗原抗体相对应出现阳性反应,则诊断血清中出凝集块,而盐水侧则为均匀的乳白色。否则为阴性反应。
   (二)试管凝集反应
   (1)排列洁净干燥试管8支于试管架上。
   (2)用吸管吸取生理盐水,分别加0.5ml于各试管中。吸取10倍稀释的被检血清,加0.5ml于第一管中。
   (3)自第一管开始稀释,使充分混合,然后吸出0.5ml放入第二管,依次稀释至第七管,在从第七管内吸出0.5ml弃去。第一管至第七管血清稀释度为1∶20,1∶40,1∶80,1∶160,  1∶320,1∶640;1∶1280。第八管不加血清,作为对照。
   (4)吸取诊断菌液,每管加0.5ml(加菌液时由对照管向前依次加入),此时每管内的血清稀释度又增加一倍。其操作程序见表15-1。
   (5)摇匀后,放37℃温箱18~24h或37℃水浴箱4h后观察结果。观察结果时先观察对照管,再观察各试验管。注意观察凝集颗粒的松软、大小、均匀度等性状以及液体的混浊程度。若液体仍呈均匀混浊或经振摇后呈混浊者为阴性结果;上部液体较清亮,同时管底有凝集块者为阳性反应。阳性反应者可根据下面标准确定凝集的强弱。
   ++++ : 完全凝集、上清液澄清。
   +++  :大部凝集、上清液微混。
   ++  :中等凝集、上层液较混浊。
   +  :少量凝集、上层液混浊。
   -  :无凝集、菌液混浊。
   记录结果后判定效价(又称滴度)。凝集效价是指能发生中等凝集(++)现象的最高血清稀释度。

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