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第一章 绪论
第二章 实验研究的基本要素及人员条件
第三章 文献综述及文献检索
第四章 科学研究的选题和设计
第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
第八章 基础医学实验常用仪器及器件
第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
第十一章 膜片钳技术
第十二章 组织细胞培养技术
第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第二节 苯海拉明对组胺的竞争性拮抗作用(PA2值的测定)
2009-06-02 13:57  

【实验目的】

观察组胺对小肠收缩的影响,测定苯海拉明的拮抗参数PA2值。

【实验原理】

组胺(histamine)可局部作用于H1受体,引起胃、肠道、气管、支气管平滑肌收缩。H1受体阻断药苯海拉明(diphenhydramine)对组胺具有竞争性拮抗作用,其作用强度可用拮抗参数(PA2值)来反映。当激动药与拮抗药合用时,拮抗药使两倍浓度的激动药仅产生原浓度激动药的反应水平,此时该拮抗药的摩尔浓度的负对数值为PA2值。本实验通过测定苯海拉明对组胺的拮抗参数PA2值,介绍了如何评价拮抗药的作用强度。

【实验对象】

豚鼠,体重300g左右,雌雄均可。

【试剂与器材】

磷酸组胺溶液10-7mol/L,10-6mol/L,10-5mol/L,10-4mol/L,10-3mol/L,10-2mol/L,10-1mol/L;苯海拉明溶液10-5mol/L,5×10-5mol/L,10-4mol/L;台氏液(Tyrode's solution);BL-420微机型生物机能实验系统,恒温水浴箱,麦氏浴槽,张力换能器,手术器械,铁架台,培养皿,注射器。

【实验方法与步骤】

1. 制备肠段 取豚鼠一只,击头处死,迅速剖腹,取出回肠,放入盛有台式液的培养皿中。用注射器吸取台式液,冲洗肠管至少三遍,将肠内容物清除。剪成约2cm长肠段备用。

2. 组胺的小肠收缩作用 将肠段两端结扎,一端固定在浴槽中,另一端固定于换能器上。浴槽中加入15ml台式液,恒温在37±0.5℃,通入氧气。待肠段稳定10min后,记录一段基线。然后加入不同浓度组胺溶液(表23-1)。每次加完后,待肠管张力不再增加,方可加入下一次组胺溶液。记录收缩曲线。

3. 苯海拉明的拮抗作用 用台式液冲洗浴槽三次,浴槽内溶液仍为15ml,加入10-5 mol/L苯海拉明0.2ml,待肠管稳定5min后,依上述方法加入不同浓度组胺溶液,记录收缩曲线。再次冲洗浴槽,加入5×10-5mol/L苯海拉明0.2ml,待肠管稳定5min,依上述方法加入不同浓度组胺溶液,记录收缩曲线。与上述类似,冲洗浴槽后,加入10-4 mol/L苯海拉明0.2ml,记录收缩曲线。

4. 计算PA2值 可利用BL-420微机型生物机能实验系统计算,亦可使用三点法、Scott比值法进行计算(详见参考书目)。

1)先测量组胞各累积浓度的收缩反应强度,然后以效能为百分之百计算

2)求出各浓度的反应百分率,以组胺终浓度为横坐标,反应百分率为纵坐标在微机或坐标纸上给出量曲线,从量曲线上分别求出拮抗剂前后激动剂引起50%反应所需约剂量(ED50),代入公式计算PA2值。

PA2=log(E′/E-1)-logB

E′:有拮抗剂时激动剂的ED50;

E:无拮抗时激动剂的ED50;

B:拮抗剂的摩尔浓度。

【注意事项】

1. 制备肠段时,注意操作规范,尽量避免损伤,以免影响后续收缩功能的测定。

2. 加入药量必须准确,药液可以直接加在浴槽内溶液的液面上。

  思 考 题

1. 试述竞争性拮抗剂与非竞争性拮抗剂的区别。

 

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