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第一章 绪论
第二章 实验研究的基本要素及人员条件
第三章 文献综述及文献检索
第四章 科学研究的选题和设计
第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
第八章 基础医学实验常用仪器及器件
第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
第十一章 膜片钳技术
第十二章 组织细胞培养技术
第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第一节 常规切片的制作过程
2009-06-02 14:01  

【实验目的】

1. 了解常规切片的制作过程。

2. 熟悉苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色方法。

【实验原理】

将各种方法(活检、尸检)获取的组织标本经过一定的步骤处理,做成切片。苏木素是碱性染料,可将细胞核(嗜碱性物质)染成蓝色,伊红是酸性染料,可将多数细胞的细胞质(嗜酸性物质)染成红色,形成色彩鲜艳、结构清晰的组织图像。

【实验对象】 

尸检来源的正常肺组织。

【实验药品与器材】

1. 器材 手术刀、恒温箱、石蜡切片机、显微镜。

2. 试剂 10%福尔马林,梯度酒精(70%、80%、90%、95%),无水酒精,二甲苯,包埋石蜡,苏木素染液,伊红染液。

【实验方法与步骤】

1. 取材和固定 用锋锐的手术刀细致而迅速地取下一块大小适宜(1.5×1.5×0.2 cm)的肺组织块,立即投入10%福尔马林内固定24 h,也可多放一段时间待用时取出(最好不要超过48h)。

2. 脱水 依次经过70%(2 h)、80%(2 h)、90%(2 h)、95%酒精(Ⅰ、Ⅱ 各2 h)和无水酒精(Ⅰ、Ⅱ各1 h)脱水,二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ 各1 h),以置换组织内的酒精溶液。

3. 包埋 将透明好的组织块置入已在温箱(58℃~60℃)内熔化的石蜡内(Ⅰ、Ⅱ 各2 h),使石蜡浸入组织并替换出二甲苯。在包埋器的内壁涂一层甘油,倾入熔化的石蜡,将浸透蜡的组织块放入包埋器(待切面朝下),摆好间距和方位,待蜡液表面凝固后,将包埋器投入冷水浴中,使石蜡冷却凝固。

4. 切片 将蜡块固定于切片机,切成5μm厚的切片,在45℃的水面上展平后捞在涂有防脱剂的载玻片上,置60℃烤箱2h。

5. 脱蜡 二甲苯脱蜡(Ⅰ、Ⅱ 各15min),不同浓度酒精(100%、95%、80%、70%)置换二甲苯并经蒸馏水水化后即可进行染色。

6. 苏木精-伊红染色 将经处理的组织切片置苏木素染液中染5min,自来水冲洗,稀盐酸分化后,置流水中充分冲洗返蓝;伊红染液染色2~3min,流水冲洗干净。

7. 脱水、透明和封固 染好的切片经梯度酒精脱水(70%、80%、95%、100%)各5min,二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ 各5 min),在载玻片上加一滴中性树胶,然后覆盖一片清洁的盖玻片。

8. 显微镜观察。

【注意事项】 

1. 每取完一例标本后,所有的工具如刀、剪、盘、镊、切板等,必须用水冲洗干净,以免污染。

2. 尽量保持组织的原有形态,勿使组织块受挤压,切取标本的大小不超过2.0 cm×2.0 cm×0.2 cm。

3. 依据组织块大小确定脱水、透明和浸蜡时间。时间过长,组织块过硬、变脆;时间不够,则组织块硬度不够,且HE染色时核浆蓝染,界限不清,不利于观察。

4. 苏木素染后应充分返蓝,使细胞色彩鲜明,结构清晰。

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