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第一章 绪论
第二章 实验研究的基本要素及人员条件
第三章 文献综述及文献检索
第四章 科学研究的选题和设计
第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
第八章 基础医学实验常用仪器及器件
第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
第十一章 膜片钳技术
第十二章 组织细胞培养技术
第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第一节 细菌的生化鉴定法
2009-06-02 14:08  

各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物特性,这种差异就表现得更加明显。不同细菌具有不同的酶系统,故不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同,它们对物质的代谢谱和分解产物也就不同,利用这种特点建立细菌生化反应,在菌株的分类鉴定中具有主要意义。

【实验目的】

1. 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理。

2. 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法。

【实验原理】

各种细菌由于具有不同的酶系统,致使它们能利用不同的底物,或虽然可以利用相同的底物,却产生不同的代谢产物,因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。

【试剂与器材】

1. 菌种 大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的斜面菌种

2. 培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基(葡萄糖、乳糖或蔗糖)

3. 试剂 40%NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。

4. 器具 超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。

5. 流程 糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验。

【实验方法与步骤】

1. 糖发酵实验

① 试管标记 取分别装有不同糖类(如葡萄糖、蔗糖和乳糖等)发酵培养液的试管,根据需要培养的细菌做好标记(如大肠埃希菌、产气肠杆菌、普通变形菌等和空白对照)。

② 接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中,空白对照中不接种,置37℃恒温箱中培养,分别在培养24h、48h和72h观察结果。

③ 观察记录 培养后各发酵管与空白对照相比,若接种培养液保持原有颜色,其反应结果为阴性,表明该菌不能利用该种糖,记录用“-”表示;如培养液呈黄色,反应结果为阳性,表明该菌能分解该种糖产酸,记录用“+”表示。培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应,表明该菌分解糖能产酸并产气,记录用“+”表示;如杜氏小管内没有气泡为阴性反应,记录用“-”表示。

2. V.P.试验

① 标记试管 取装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管,根据需要将培养的细菌做好标记。

② 接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中,空白对照管不接种,置37℃恒温箱中,培养24~48h。

③ 观察记录 取出以上试管,振荡2min。另取5支空试管相应标记菌名,分别加入3~5ml以上对应管中的培养液,再加入40%NaOH溶液10~20滴,并加入约0.5~1mg微量肌酸,振荡试管,以使空气中的氧溶入,置37℃恒温箱中保温15~30min后,若培养液呈红色,记录为V.P.试验阳性反应(用“+”表示);若不呈红色,记录为V.P.试验阴性反应(用“-”表示)。

注:原试管中留下的培养液用作甲基红试验。

3. 甲基红试验(M.R.试验)

取装有葡萄糖蛋白胨水培养液的试管,接种需培养鉴定的细菌,经过夜培养后,加入2~3滴甲基红指示剂,注意沿管壁加入,仔细观察培养液上层,若培养液上层变成红色,即为阳性反应;若仍呈黄色,则为阴性反应,分别用“+”或“-”表示。

4. 吲哚试验

① 试管标记  取装有蛋白胨水培养液的试管,根据需要培养的细菌做好标记。

② 接种培养  以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中,第5管作空白对照不接种,置37℃恒温箱中培养24~48h。

③ 观察记录  在培养液中加入5~10滴吲哚试剂,使试剂浮于培养物表面,形成两层,观察结果:如有吲哚存在,乙醚层呈现玫瑰红色,此为吲哚试验阳性反应,否则为阴性反应,阳性用“+”、阴性用“-”表示。

 

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