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第一章 绪论
第二章 实验研究的基本要素及人员条件
第三章 文献综述及文献检索
第四章 科学研究的选题和设计
第五章 数据的记录于处理
第六章 实验报告与论文的撰写
第七章 医学实验的数学建模
第八章 基础医学实验常用仪器及器件
第九章 医学实验动物及其操作技术
第十章 血液流变学检测
第十一章 膜片钳技术
第十二章 组织细胞培养技术
第十三章 染色体分析技术
第十四章 分子生物学技术
第十五章 免疫学技术
第十六章 细菌学实验技术
第十七章 组织学技术
第十八章 流式细胞术及其应用
第十九章 电镜技术与生物医学超微结构
第二十章 激光扫描共聚焦显微镜技术
第二十一章 模拟实验
第二十二章 生理学实验
第二十三章 药理学实验
第二十四章 形态学实验
第二十五章 分子生物学实验
第二十六章 微生物学实验
第二十七章 免疫学实验
第二十八章 医学化学实验
第二十九章 药学实验
第三十章 实验动物行为学实验方法
第三十一章 综合实验
附录

 
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第五节 心律失常模型的建立与药物作用
2009-06-02 20:17  

【实验目的】

1. 学习使用氯化钡制作动物实验性心律失常的方法。

2. 观察普萘洛尔、奎尼丁、利多卡因等抗心律失常药对氯化钡诱发的心律失常的预防作用。

3. 制备大鼠右心室肌标本,观察普萘洛尔、奎尼丁、利多卡因等对离体心室肌实验性自律性的影响。

【实验原理】

心肌细胞的电生理特性表现为自律性、兴奋性和传导性。心律失常(cardiac arrhythmia)是指心脏冲动的起源部位、频率、节律、传导速度与激动次序的异常。其发生的机制包括冲动起源的异常、冲动传导的异常或二者兼而有之。心律失常的临床表现有窦性心动过速、窦性心动过缓、窦性心律不齐、窦性停搏,逸搏、期前收缩(房性、室性、房室交界性)、阵发性心动过速(房性、室性、房室交界性)、心房或心室扑动、颤动等。抗心律失常药物通过不同的作用机制,纠正心肌细胞离子转运紊乱,发挥抗心律失常作用。

制作实验性心律失常模型的方法很多,概括起来有①电刺激引起的心律失常。②结扎冠状动脉引起的心律失常。结扎冠脉一定时间后松扎,可制作缺血再灌注心律失常模型,除观察心电图的改变外,尚可观察血清中心肌酶的改变以及心肌梗死面积等指标。③药物诱导的心律失常。常用于诱发心律失常的药物有蛙巴因、乌头碱、氯仿-肾上腺素、氯化钡、氯化钙、强心苷等。氯化钡可增加心室浦氏纤维细胞Na+ 内流,抑制K+ 外流,促进舒张期自动去极化,使心肌细胞自律性增高,诱发室性心律失常。还可以通过离体心肌组织、心肌细胞培养和膜片钳实验等技术研究药物的抗心律失常作用机制。

【实验对象】

大白鼠16只,雌雄不拘,体重200~300g。

【实验试剂与器材】

1. 药品与试剂 0.5%氯化钡(barium chloride)、0.1%普萘洛尔(propranolol)、0.5%奎尼丁(quinidine)、0.5%利多卡因(lidocaine)、生理盐水、25%氨基甲酸乙酯(乌拉坦,urethane)、0.9%氯化钠注射液、台氏液(Tyrode's solution,成分:NaCl 8.0g,KCl 0.2g,CaCl2 0.2g,NaHCO3 1.0g,NaH2PO4 0.05g,MgCl2 0.1g,葡萄糖 1.0g,加蒸馏水至1000mL)、无钙台氏液(台氏液中去除CaCl2和MgCl2)。

2. 器材 生物信号记录分析系统、心电导联线、大鼠手术台、手术器械(手术剪、手术镊、眼科剪、眼科镊等)、注射器等。

【实验方法与步骤】

1. 取大白鼠12只,称重后编号,随机分为用药组(分别为普萘洛尔组、奎尼丁组和利多卡因组)及对照组,每组3只。

2. 每只动物腹腔注射氨基甲酸乙酯1~1.5g/kg麻醉后,仰卧位固定于大白鼠手术台上。

3.开启生物信号记录分析系统,将连有导联线的针型电极插入大鼠四肢末端皮下,按以下次序连接导联线:红色——右前肢,黄色——左前肢,蓝色(或绿色)——左后肢,黑色——右后肢,记录标准电压和Ⅱ导联心电图。调整心电图波幅大小和基线位置,稳定5min后开始给药。

4. 给药组大白鼠分别腹腔注射普萘洛尔 2mg/kg、奎尼丁 10mg/kg或利多卡因10mg/kg,对照组大鼠腹腔注射等容积生理盐水,立即开始计时,分别记录每只动物给药后1min,3min和5min的心电图。

5. 给药5min后给每只大鼠快速静脉注射氯化钡 2~4mg/kg,立即记录心电图,观察给药后15s,30s及1min、3min、5min、10min、15min、20min和30min心电图的改变情况,比较给药组和对照组心律失常发生的潜伏期(s)和持续时间(min)有无差异。

6. 制备离体大鼠右心室肌标本  取大鼠,腹腔注射氨基甲酸乙酯1~1.5g/kg麻醉后,迅速开胸,取出心脏,放入盛有饱和氧的室温台氏液的培养皿中,剪下右心室肌,将其底端固定在盛有37℃台氏液的恒温浴管中,顶端(心尖部)经丝线与张力传感器相连(标本负荷约1g),通过生物信号记录分析系统记录其收缩曲线。该标本的自动收缩频率约为60次/min。

7. 稳定10~15min后,记录大鼠离体右心室肌的自发收缩频率,之后,向浴液中分别滴加0.9%氯化钠注射液、0.1%普萘洛尔、0.5%奎尼丁或0.5%利多卡因各0.2mL,观察大鼠离体右心室肌标本自发收缩频率的变化情况,比较给药组与对照组之间的差异是否存在显著性。

【注意事项】

1. 针型电极务必插入四肢皮下。如插入肌肉组织,则肌电将干扰心电的记录。

2. 氯化钡溶液应临用前新鲜配制,静脉注射速度要快,否则难以造成心律失常。

3. 给氯化钡后要连续记录心电图才能观察到心律失常转变的全过程。

4. 大鼠尾静脉注射有难度时,可选用舌静脉注射,或采用分离股静脉,插管给药法。

5. 制备大鼠离体右心室肌标本时动作一定要迅速,以保持标本具有良好的活性。

6. 离体右心室肌实验中,恒温浴管中要通氧气。

7. 大鼠离体右心室肌标本置浴管中后,标本至少要稳定10min,并使该标本每分钟的收缩节律相差不超过10次才可开始给药。

  思 考 题

1. 氯化钡的致心律失常作用机制如何?还有哪些药物可致心律失常?其机制如何?

2. 奎尼丁、普萘洛尔、利多卡因分别属于哪些类型的抗心律失常药?通过何种机制发挥抗心律失常作用?其适应证有哪些?

3. 奎尼丁、普萘洛尔、利多卡因对心室肌的自律性有何影响?

4. 结扎冠状动脉或采用缺血再灌注法制备心律失常模型,心电图有哪些典型变化?还可观察哪些指标?

 

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